現貨現發隔天到達
真人真事真本事
咨詢熱線13158823830
咨詢熱線13158823830
質保3年只換不修，廠家長沙實了個驗儀器制造有限公司。
電穿孔技術（Electroporation）是現代分子生物學與細胞工程實驗中不可替代的重要方法。它通過在細胞膜上施加瞬間高電場，使膜結構暫時改變并形成可逆性孔洞，從而實現外源 DNA、RNA 或蛋白質分子的導入。相比化學轉染或病毒載體法，電穿孔具有無污染、效率高、可重復性好、細胞類型適用范圍廣等優點。
伯樂（Bio-Rad）GenePulser Xcell 電穿孔儀作為國際廣泛應用的高端電穿孔系統，憑借精確的電參數控制、智能化操作界面和強大的數據記錄功能，為科研人員提供了極高的實驗可控性與重現性。本文旨在系統總結該儀器的實驗過程、性能特點、應用成果及優化經驗，為相關科研人員提供可參考的標準化實驗總結資料。
GenePulser Xcell 系統由主機、電容模塊、電阻模塊、波形控制單元、電極槽、操作面板和安全保護裝置組成。它既能輸出指數衰減波（Exponential Decay），也能產生方波（Square Wave），從而滿足從原核生物到真核細胞的不同實驗需求。
主要性能特點如下：
高精度電控系統：電壓誤差小于±1%，電容偏差小于±0.5%。
波形可調性強：支持單脈沖、多脈沖、連續波形輸出。
智能參數記錄：可儲存多達 99 組實驗方案與放電結果。
安全保護完善：具備自動放電、防電擊和溫度保護功能。
高復現性設計：閉環反饋電路實時校正輸出信號，確保每次實驗一致。
該系統尤其適用于 DNA 轉化、RNA 導入、siRNA 干擾實驗、蛋白轉入及基因編輯研究。
電穿孔的本質是電場誘導細胞膜通透性瞬時增加。GenePulser Xcell 通過瞬時高壓放電，在細胞膜表面形成跨膜電勢。當膜電勢超過閾值（約 0.5–1.0 V）時，脂質分子排列改變，形成瞬時孔洞，外源分子進入細胞。電壓撤除后，膜結構迅速恢復，完成外源物導入。
主要影響參數包括：
電壓（Voltage, V）：決定電場強度；
電容（Capacitance, μF）：決定能量儲存量與放電持續時間；
電阻（Resistance, Ω）：控制電流釋放速率；
脈沖時間（Pulse Duration, ms）：決定細胞膜孔開放時間；
電極間距（Gap, cm）：影響電場均勻性；
介質導電性與溫度：影響能量傳遞與細胞生存率。
儀器檢查：確認電極槽無殘液、主機接地可靠、顯示正常。
樣品制備：細胞處于對數生長期，DNA/RNA 純度高，無鹽離子污染。
環境條件：實驗溫度 20–25℃，濕度 40–60%。
啟動電源，選擇模式（指數衰減或方波）；
設定電壓、電容、電阻等參數；
加載混合樣品（細胞 + DNA）；
插入電穿孔杯并關閉防護蓋；
按下“PULSE”鍵執行放電；
待自動放電完成后，取出樣品進行復蘇培養。
將電穿孔后的細胞立即加入復蘇培養基中；
室溫靜置 5–10 分鐘以促進膜修復；
隨后進行培養、篩選或熒光檢測。
條件設置：指數衰減波，2.5 kV，25 μF，200 Ω，電極間距 0.2 cm。
結果：轉化效率達 2.1×10? CFU/μg DNA，細胞存活率約 85%。
結論：在高電壓短脈沖條件下能實現高效率轉化，參數重復性良好。
條件設置：1.5 kV，50 μF，400 Ω，1 M 山梨醇緩沖液。
結果：轉化率穩定在 10? CFU/μg DNA，重復實驗誤差小于 8%。
結論：緩沖液滲透壓穩定對細胞膜保護作用顯著，增強存活率。
條件設置：方波模式，250 V，10 ms，間隔 0.5 s，脈沖 2 次。
結果：轉染效率達 78%，細胞存活率維持 82%。
結論：方波模式能量釋放均勻，適合哺乳動物細胞。
條件設置：方波，400 V，20 ms，3 次脈沖。
結果：GFP 表達率達 70%，膜修復完全。
結論：較長脈沖能增強導入量，但需注意防止滲透壓應激。
在連續 20 次重復實驗中，GenePulser Xcell 電壓輸出誤差小于 0.5%，轉染效率標準差低于 5%，表現出優異的復現性。
復現性提升的關鍵因素包括：
參數自動校準系統：儀器自動檢測輸出誤差并修正；
閉環反饋回路：實時調整放電波形；
溫控設計：防止放電過程產生局部過熱；
標準化耗材使用：原廠電穿孔杯間距精度高。
轉染效率 (%)：熒光陽性細胞數 / 總細胞數 ×100%；
細胞存活率 (%)：復蘇后活細胞數 / 初始細胞數 ×100%；
重復性（CV%）：標準差 / 平均值 ×100%。
CV < 10%：實驗條件穩定；
CV 10–20%：需優化樣品或緩沖液；
CV > 20%：儀器或操作問題需排查。
杭州實了個驗生物科技有限公司
