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伯樂電穿孔儀 165-2660 是一種高性能、高精度的電轉化設備，廣泛應用于基因導入、細胞融合及分子遞送實驗中。
該儀器通過高壓脈沖在細胞膜上產生瞬時可逆微孔，使外源 DNA、RNA 或蛋白質進入細胞內部。
在整個實驗過程中，操作的規范性直接決定實驗結果的成功率與重復性。
電穿孔操作看似簡潔，實則對參數設置、樣品處理和操作順序要求極高。
正確掌握操作要點不僅能提高轉化效率，還能有效避免電弧、設備損壞或樣品死亡。
實驗環境需保持干燥、整潔、無粉塵。
電源應為獨立接地插座，電壓 220V ±10%，頻率 50/60Hz。
工作臺表面平整、防震，遠離高壓設備及金屬導體。
環境溫度控制在 20–25℃，相對濕度 ≤80%。
電穿孔操作應在生物安全柜或潔凈區域內完成，以防污染。
在開機前，必須進行以下檢查：
電源線及接地線完好，無破損。
ShockPod 電擊槽內干燥、無液體殘留。
電擊杯清潔無裂紋，電極表面光滑。
模塊連接牢固，顯示屏完好。
打開電源后自檢正常，屏幕顯示“READY”方可操作。
若發現異常（如錯誤代碼、風扇停轉、界面無響應），應立即停止使用并排查。
選擇對數生長期的細胞，確保活性高、狀態健康。
用低鹽緩沖液洗滌 2–3 次，去除培養基中的離子。
調整細胞濃度：
細菌：1×10? cells/mL；
酵母：1×10? cells/mL；
哺乳動物細胞：1×10?–1×10? cells/mL。
加入 DNA/RNA 溶液后輕輕混勻，避免劇烈振蕩。
預冷樣品與電擊杯 5 分鐘，降低熱損傷。
打開電源開關，等待系統自檢完成。
檢查液晶屏顯示是否正常，確認系統進入主界面。
若使用 CE 或 PC 模塊，確認儀器識別成功。
進入所需操作模式：
Preset Protocol（預設程序）：選擇系統默認細胞類型參數；
Manual Setup（手動模式）：自行設置參數；
User Program（用戶程序）：加載已保存的實驗方案。
電壓決定電場強度，是影響穿孔效果的核心參數。
典型范圍：10–3000 V。
推薦范圍：
細菌：1800–2500 V；
酵母：1000–1500 V；
哺乳動物細胞：300–800 V。
設定電壓時應與電擊杯間隙匹配（0.1/0.2/0.4 cm），保持適當電場強度。
電容范圍：25–3275 μF，可調節能量釋放速率；
電阻范圍：50–1000 Ω 或 ∞（開路）。
時間常數 τ = R × C，用于評估電壓衰減速度。
常見時間常數值為 4–7 ms（細菌）或 2–5 ms（真核細胞）。
指數衰減波（Exponential Decay）：適合細菌、酵母、植物原生質體；
方波（Square Wave）：適合哺乳動物細胞。
方波模式下可設置單次脈沖時間（0.05–10 ms）與次數（1–10 次）。
多脈沖模式對細胞損傷小，適合敏感細胞。
設定完成后按“ENTER”確認，可通過“SAVE”保存參數組，方便下次調用。
將 100–400 μL 樣品加入電擊杯。
輕敲杯壁排除氣泡，保持液面平整。
確認液體不溢出杯口。
將電擊杯放入 ShockPod 槽內，確保與電極完全接觸。
蓋上 ShockPod 上蓋，儀器自動檢測閉鎖狀態。
若未閉合，屏幕提示“ERR01：蓋未閉合”。
按“PULSE”鍵進入充電狀態，屏幕顯示“CHARGING”。
當提示“READY TO PULSE”時，按“ENTER”執行放電。
放電瞬間完成，儀器自動顯示輸出電壓、時間常數、能量釋放百分比。
待屏幕顯示“COMPLETE”后，方可取出電擊杯。
放電時嚴禁觸碰儀器和電擊槽；
不可打開上蓋或移動樣品；
若出現閃光或異常聲響，應立即停止實驗；
不得連續高壓放電超過 10 次，防止溫度過高。
放電完成后，使用無菌移液器立即將樣品轉移至恢復培養基中。
對細菌樣品，恢復時間一般為 30 min；哺乳動物細胞為 1–2 h。
電擊杯應用去離子水清洗后晾干備用。
若出現液體溢出，應使用無塵紙擦拭 ShockPod 內壁。
伯樂電穿孔儀 165-2660 自動顯示以下數據：
輸出電壓（V）
時間常數（τ）
樣品電阻（Ω）
能量釋放百分比（%）
波形類型與脈沖次數
這些數據應記錄在實驗日志中，形成可追溯文件。
插入 USB 存儲設備；
進入菜單 “Data Export”；
選擇文件格式（CSV 或 TXT）；
導出并保存至計算機。
| 錯誤操作 | 后果 | 正確做法 |
|---|---|---|
| 樣品含鹽量過高 | 電弧放電、樣品損壞 | 使用低鹽緩沖液 |
| 樣品有氣泡 | 放電不均、局部過熱 | 加樣后輕敲杯壁 |
| 未閉合蓋強行放電 | 系統報警或損壞 | 確保蓋完全閉合 |
| 高壓連續放電 | 模塊過熱 | 每次間隔至少 10 秒 |
| 使用裂紋電擊杯 | 漏電或短路 | 更換新杯 |
| 未預冷樣品 | 細胞死亡率高 | 樣品、電擊杯置冰上預冷 |
| 未清潔 ShockPod | 導電污染 | 每次實驗后清潔干燥 |
操作者需經過高壓設備使用培訓。
放電時嚴禁觸摸電擊槽與電極部分。
保持設備干燥，避免液體進入內部。
不得使用金屬鑷子接觸電擊杯電極。
每次實驗結束后，關閉電源并拔掉電源線。
若出現異味或煙霧，立即切斷電源。
不得擅自拆機或改裝。
采用逐級提升法，觀察轉化率與存活率，找到最佳平衡點。
使用低離子強度緩沖液，如無鈣無鎂 PBS 或專用 electroporation buffer，可顯著減少電弧。
在冰上操作并保持樣品低溫，防止過熱導致細胞死亡。
保持合適濃度，避免團聚或電流過大。
不同間隙對應不同電場強度，應根據細胞體積選擇合適型號。
對于真核細胞，可使用 2–3 次低電壓脈沖提高導入效率。
關閉電源，等待 10 秒以釋放殘余電荷。
清潔 ShockPod 槽，用干布擦拭，保持干燥。
電擊杯用去離子水沖洗三次并晾干。
外殼用無水乙醇或濕布輕拭，避免使用腐蝕性溶劑。
每月檢查通風口與風扇是否正常運轉。
每三個月進行一次電壓校準。
長期不使用時，覆蓋防塵罩并置于干燥環境中。
重復實驗驗證：相同參數重復 3 次，結果差異 ≤10% 為合格。
記錄制度：保存電壓、電容、時間常數等關鍵參數。
對照實驗：每批實驗設陰性對照（無 DNA）與陽性對照（已驗證條件）。
數據分析：繪制電壓—效率曲線或時間常數分布圖，尋找最佳參數區。
設備監控：定期導出系統日志，查看放電記錄。
| 現象 | 可能原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
| 電弧放電 | 緩沖液離子強度高 | 使用低鹽 buffer |
| 電壓無輸出 | 模塊接觸不良 | 重新插緊模塊 |
| 屏幕無顯示 | 電源問題或保險絲損壞 | 檢查更換保險絲 |
| 樣品死亡率高 | 電壓過高或脈沖太長 | 降低參數 |
| 電擊后液體加熱 | 電容過大或樣品體積過小 | 調整參數 |
| 放電后無信號 | 電擊蓋未閉合 | 確認蓋鎖狀態 |
| 轉化率低 | 細胞狀態差或 DNA 質量差 | 更換新細胞與純化 DNA |
檢查儀器與環境 → 確認電源、蓋鎖、接口安全。
準備樣品 → 細胞狀態良好，使用低鹽緩沖液。
設置參數 → 選擇合適電壓、波形與電容。
加樣與放電 → 排氣泡，蓋緊上蓋，執行脈沖。
數據記錄 → 保存實驗參數與結果。
樣品恢復 → 立即加入培養基恢復。
設備清理 → 斷電、清潔、晾干、覆蓋防塵罩。
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