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伯樂（Bio-Rad）電穿孔儀165-2660是一款高精度、智能化的電轉化設備，廣泛應用于分子生物學、細胞工程及基因編輯領域。該設備以高能脈沖電場為核心技術，通過瞬時放電在細胞膜上形成可逆性微孔，使外源DNA、RNA或蛋白分子能夠進入細胞內部，從而實現轉化或轉染。其設計兼顧實驗穩定性與操作靈活性，能夠滿足不同類型細胞的電穿孔需求，包括細菌、酵母、哺乳動物細胞以及植物原生質體。
165-2660電穿孔儀采用先進的數字化控制系統，具有自動檢測電阻、電容及脈沖輸出的功能。設備具備多種模式可選，可進行時間常數模式與方波脈沖模式切換，以適配不同實驗體系。其可靠的硬件結構與精密的能量輸出控制，為實驗重復性和細胞存活率提供了技術保障。
精確的脈沖控制系統
設備采用高性能微處理芯片，可實時監控電壓、電流及時間常數。電場強度可在0.2 kV至2.5 kV范圍內連續調節，滿足從原核生物到真核細胞的不同需求。
寬范圍參數調節
電容值可在25 μF至3300 μF之間設定，電阻可根據實驗要求自動匹配，從而獲得理想的時間常數（通常在4–6 ms范圍）。這種可調節設計極大地提高了實驗靈活性。
高安全性與重復性
儀器具備過壓保護與自動放電系統，可在操作結束后迅速釋放殘余電荷，防止誤觸電擊。輸出波形穩定，重復誤差小于1%，保證了實驗結果的可重復性。
人性化操作界面
前面板設計簡潔，配有高亮液晶顯示屏，可清晰顯示設定電壓、時間常數、脈沖次數及輸出曲線。旋鈕式參數調節與數字化輸入結合，操作直觀且響應迅速。
兼容多種電穿孔杯
設備支持0.1 cm、0.2 cm及0.4 cm間隙的電轉杯，適應不同細胞類型的轉化體積與電場強度需求。
電穿孔的核心是電場強度（E）、脈沖時間（t）與細胞類型三者的匹配。一般公式為：
E=VdE = \frac{V}fxh7nvpE=dV
其中V為設定電壓，d為電轉杯間隙。不同細胞對電場強度敏感性不同，因此合理設定參數是成功轉化的關鍵。
電壓設定
對于大腸桿菌等細菌，推薦設定電壓為1.8–2.5 kV；
對于酵母，通常使用0.8–1.5 kV；
對于哺乳動物細胞，如CHO、HEK293等，則建議電壓控制在0.25–0.8 kV范圍。
電容與時間常數
時間常數τ由電容C與電阻R共同決定：
τ=R×C\tau = R \times Cτ=R×C
一般來說，細菌電轉的理想時間常數為4–5 ms，真核細胞可適當延長至8–10 ms。165-2660內置自動時間常數測量功能，可在放電完成后自動顯示τ值，方便優化。
脈沖次數與間隔
設備可設定單脈沖或多脈沖輸出。單脈沖模式用于標準轉化實驗，多脈沖模式適用于需要更高DNA攝取率的哺乳細胞。脈沖間隔可在50–500 ms內調節，以防止過熱損傷。
大腸桿菌轉化
電轉杯：0.2 cm
電壓：2.5 kV
電容：25 μF
電阻：200 Ω
時間常數：約5 ms
結果：轉化效率高，細胞存活率良好。
酵母電穿孔
電轉杯：0.2 cm
電壓：1.2 kV
電容：50 μF
時間常數：約7 ms
需在預冷條件下進行，防止熱損傷。
哺乳動物細胞轉染
電轉杯：0.4 cm
電壓：0.45 kV
電容：250 μF
脈沖數：2
間隔：100 ms
建議在無血清緩沖液中操作，以提高穿孔效率。
植物原生質體電穿孔
電轉杯：0.4 cm
電壓：0.8 kV
電容：1000 μF
時間常數：約10 ms
實驗后需立即在滲透平衡液中復蘇。
設備準備
將電穿孔儀165-2660接入穩定電源，檢查電纜與轉杯連接是否牢固。確保儀器處于待機狀態。
細胞樣品準備
采用無鹽緩沖液洗滌細胞，去除導電離子，避免放電時產生電弧。DNA或質粒樣品應純度高，無雜質。
裝樣與電轉
將樣品與DNA混勻后加入電轉杯，輕輕敲擊使液體均勻分布。插入轉杯槽位，蓋緊安全蓋。根據預設程序啟動脈沖。
放電與顯示
放電后屏幕將自動顯示實際電壓、電流及時間常數。記錄數據以便分析。
復蘇與培養
放電完成后立即將樣品轉入適當復蘇培養基中，靜置或輕搖數分鐘后按實驗要求培養。
實驗者應記錄每次轉化的關鍵參數，包括電壓、電容、時間常數、樣品體積及轉化效率。通過比較不同參數組合的結果，可逐步優化實驗條件。
若出現電弧放電，可適當降低電壓或更換緩沖液；若轉化效率偏低，可延長時間常數或增加脈沖次數。
日常清潔
使用后應立即取出轉杯，用無離子水清洗并晾干，防止鹽分殘留。儀器外殼可用柔軟布輕拭，避免使用有機溶劑。
電極檢查
定期檢查電極表面是否有腐蝕或燒蝕痕跡。若發現損傷，應及時更換以防影響電場均勻性。
軟件與校準
每隔6個月應進行一次校準測試，確保電壓輸出準確。Bio-Rad官方提供校準工具包與軟件升級包，可通過USB接口更新。
儲存條件
儀器應放置于干燥、無塵環境，避免陽光直射與高溫。長期不用時，應斷開電源并覆蓋防塵罩。
放電前務必確認安全蓋關閉；
禁止在帶電狀態下更換轉杯；
實驗操作應佩戴防護手套與護目鏡；
遇到異常聲響或過熱，應立即斷電檢查。
設備具有自動放電保護系統，但仍應保持警覺，防止高壓殘留造成安全隱患。
伯樂電穿孔儀165-2660憑借其高精度控制、操作簡便與穩定輸出，被廣泛應用于基因編輯、疫苗研發、抗體篩選及細胞治療研究中。相比化學轉化和脂質轉染方法，電穿孔的優勢在于不依賴載體體系，能夠適用于多種細胞類型，并且轉化效率高、背景干擾小。
在CRISPR/Cas9系統中，該設備可實現質粒、mRNA及RNP復合物的高效導入，是精準基因操作的重要工具。
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