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質(zhì)保3年只換不修，廠家長沙實了個驗儀器制造有限公司
伯樂電穿孔儀 165-2660 是一款高精度的基因?qū)朐O備，廣泛用于真核細胞、原核細胞、酵母和植物原生質(zhì)體的電穿孔實驗。它通過瞬間高電壓脈沖在細胞膜上形成可逆性微孔，使外源 DNA、RNA 或蛋白質(zhì)進入細胞。由于該設備可實現(xiàn)電壓、脈沖時間、電容、電阻等多參數(shù)的精確控制，因此操作步驟必須規(guī)范，以確保實驗結(jié)果的準確性與可重復性。
實驗臺面：平穩(wěn)、防震、無金屬雜質(zhì)，保持干燥潔凈。
環(huán)境溫度：20–25℃，濕度不超過 80%，避免冷凝。
電源條件：220V ±10%，接地良好，電壓波動不超過 ±5%。
安全條件：設置防電弧罩及安全開關，操作者需經(jīng)過高壓設備使用培訓。
在每次開機前應完成以下檢查：
確認電源線、接地線完好無損。
檢查主機與 ShockPod、電容模塊、脈沖控制模塊接口是否牢固。
檢查電擊杯無裂紋、無液體殘留。
確認液體不接觸電極部分，防止漏電。
打開電源，進入自檢界面，屏幕應顯示系統(tǒng) READY 狀態(tài)。
細胞樣品：處于對數(shù)生長期，形態(tài)均一，無死亡或污染。
轉(zhuǎn)染質(zhì)粒或核酸分子：高純度，無蛋白和鹽分殘留。
緩沖液：使用低離子強度專用電穿孔緩沖液，如無鈣無鎂 PBS 或?qū)Ｓ?electroporation buffer。
電擊杯：根據(jù)細胞類型選擇合適間隙（0.1 cm、0.2 cm 或 0.4 cm）。
將培養(yǎng)良好的細胞離心收集，去除培養(yǎng)基，用冷卻緩沖液洗滌 2–3 次，以降低離子濃度。
使用電穿孔緩沖液重懸細胞，使?jié)舛缺３衷?1×10?–1×10? cells/mL 之間。過稀會降低導入率，過濃則易導致放電不均。
按實驗方案將 DNA 或 RNA 溶液加入細胞懸液中，一般體積比控制在 1:9。輕輕混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生氣泡。
若實驗對溫度敏感，可將細胞混合液及電擊杯置于冰上預冷 5 分鐘，以降低電擊產(chǎn)生的熱損傷。
主機置于穩(wěn)固平臺上。
將 ShockPod 電擊槽插入主機前端接口。
若需擴展功能，將 CE 模塊和 PC 模塊分別插入主機后面板的指定接口。
確認模塊連接無松動后再接通電源。
按下電源開關，系統(tǒng)自動檢測輸出電壓、電容和控制模塊是否正常。若屏幕顯示“PASS”或“READY”，即可進入操作界面。若出現(xiàn)警報代碼，須立即斷電檢查連接狀態(tài)。
儀器具有三種主要工作模式：
預設程序（Preset Protocol）：內(nèi)置常用細胞類型參數(shù)，適合初次操作。
手動模式（Manual Mode）：用戶可自定義電壓、電容、電阻、脈沖時間。
用戶程序（User Protocol）：可保存并重復調(diào)用的自定義參數(shù)方案。
使用上下鍵選擇模式，按確認鍵進入設定界面。
電壓值決定電場強度，是影響穿孔效率的關鍵參數(shù)。
電容決定能量儲存量，影響脈沖持續(xù)時間。
電阻影響放電速度與波形衰減。
方波模式需設定脈沖持續(xù)時間與次數(shù)。
常規(guī)設定示例：
細菌：1.8–2.5 kV/cm，脈沖時間 5 ms；
酵母：1.0–1.5 kV/cm，時間 8–10 ms；
哺乳動物細胞：0.3–0.8 kV/cm，時間 10–20 ms。
所有參數(shù)設定后，按“ENTER”鍵確認保存。
將混合好的細胞-DNA 懸液加入電擊杯中，體積以不超過杯容量的 80% 為宜。
檢查液面平整，無可見氣泡。
輕輕敲擊電擊杯壁以驅(qū)除微氣泡。
打開 ShockPod 上蓋，將電擊杯水平放入插槽。
對準電極位置，插入到底。
合上安全蓋后，儀器自動檢測閉合狀態(tài)，屏幕顯示“Cuvette Ready”。
按下“PULSE”鍵，系統(tǒng)開始充電。
當屏幕提示“READY TO PULSE”時，按下確認鍵，瞬間放電完成穿孔。
放電過程僅持續(xù)數(shù)毫秒，屏幕會顯示電壓曲線、時間常數(shù)等參數(shù)。
操作人員應站在安全線外，避免靠近電擊槽。
電擊結(jié)束后，等待設備提示“COMPLETE”后方可取出電擊杯。
用無菌吸管立即將樣品吸出，轉(zhuǎn)移至預溫培養(yǎng)基中。
在適宜溫度下恢復細胞活性（30–37℃，0.5–2 小時）。
若為細菌或酵母，可直接進行培養(yǎng)或涂布篩選。
在方波模式下，可設定多次脈沖：
選擇“MULTI-PULSE”選項，輸入脈沖次數(shù)與間隔。
通常 2–3 次脈沖即可，不宜過多。
間隔時間建議 3–5 秒，以利細胞膜修復。
完成電穿孔后，儀器自動保存電壓、電流、時間常數(shù)等數(shù)據(jù)，可在菜單中查看或?qū)С鲋镣獠看鎯Α?/span>
防止電弧
樣品若含鹽量高或存在氣泡，極易產(chǎn)生電弧放電，導致樣品燒毀。必須使用低鹽緩沖液并檢查液面無氣泡。
防止過熱
高電壓會造成瞬時發(fā)熱，尤其在高濃度樣品中。預冷電擊杯或分批操作可有效降低熱損傷。
保持電極清潔
每次操作后用去離子水沖洗電擊杯電極面，防止鹽結(jié)晶影響導電性能。
安全距離
放電瞬間禁止觸摸主機前端及電擊槽區(qū)域，防止高壓傷害。
重復實驗前的放電
連續(xù)多次實驗時，須等待設備內(nèi)部電容完全放電（約 10 秒），否則可能造成電壓疊加。
樣品恢復培養(yǎng)
電擊后立即加入恢復培養(yǎng)基，使細胞在適溫下培養(yǎng)，以修復細胞膜并表達外源基因。
電擊杯清潔
使用完畢的電擊杯用去離子水徹底沖洗，晾干后可重復使用 2–3 次。若出現(xiàn)裂紋或變色應立即更換。
儀器清潔與關機
用干布擦拭儀器外殼，保持無塵。
關閉電源開關并拔出插頭。
不得使用有機溶劑清潔，以防腐蝕外殼。
數(shù)據(jù)整理
將每次實驗的參數(shù)、電壓、電流及轉(zhuǎn)染效果記錄在實驗日志中，便于條件優(yōu)化。
| 問題 | 原因 | 解決辦法 |
|---|---|---|
| 電擊時電弧閃爍 | 樣品含鹽或氣泡 | 更換緩沖液、去除氣泡 |
| 屏幕無響應 | 電源線松動或保險絲損壞 | 檢查連接或更換保險絲 |
| 樣品全部死亡 | 電壓過高、時間過長 | 降低參數(shù)重新實驗 |
| 轉(zhuǎn)染效率低 | 電壓過低或細胞狀態(tài)差 | 提高電壓或優(yōu)化細胞培養(yǎng) |
| 無法識別模塊 | 模塊插頭松動 | 重新插緊并重啟系統(tǒng) |
本設備屬于高壓儀器，非操作人員禁止接觸。
操作時雙手保持干燥，避免觸電風險。
實驗結(jié)束后應立即斷電，不得讓設備長時間待機。
若出現(xiàn)異常聲音、煙霧或異味，應立刻停止使用并報告維護人員。
定期由專業(yè)技術人員進行安全檢測與校準。
每周檢查電極接頭、電源插座是否松動。
每三個月檢查主機風扇及通氣孔是否通暢。
每半年由廠家進行一次性能校準，保證輸出精度。
設備閑置時用防塵罩覆蓋，避免灰塵進入。
電容模塊屬于高能元件，若出現(xiàn)鼓包或漏液跡象，應停止使用并更換。
梯度實驗法
初次使用某種細胞時，可從低電壓逐步遞增，以確定最佳條件。
溫度控制法
對溫度敏感細胞可采用冰上操作，減少熱損傷。
多次小體積法
對大規(guī)模轉(zhuǎn)染實驗可分批進行多次小體積操作，提高成功率。
緩沖液預處理法
使用前將緩沖液過濾除菌并平衡至室溫，防止溫差影響電導。
記錄優(yōu)化
每次實驗詳細記錄電壓、電容、細胞密度、DNA 量及結(jié)果，以便形成實驗數(shù)據(jù)庫。
操作完畢后應按照以下順序關閉儀器：
退出操作界面，按下“POWER”鍵關閉主機。
拔除電源插頭。
斷開模塊與主機的連接。
將 ShockPod、電擊杯清洗干凈晾干。
整體置于干燥柜保存，避免潮濕。
伯樂電穿孔儀 165-2660 由長沙實了個驗儀器制造有限公司生產(chǎn)，出廠前經(jīng)過嚴格檢測，符合國家實驗室設備安全標準。產(chǎn)品享受 三年質(zhì)保，只換不修 服務政策。若在使用期間出現(xiàn)任何性能異常，廠家將提供整機更換支持。售后中心同時提供：
免費技術培訓與參數(shù)優(yōu)化指導；
定期校準與安全檢測；
長期零部件供應與升級服務。
杭州實了個驗生物科技有限公司
