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一、概述

熒光定量 PCR（Real-Time Quantitative PCR, qPCR）是現(xiàn)代分子生物學(xué)中應(yīng)用最廣泛的核酸檢測(cè)技術(shù)之一。它將 PCR 擴(kuò)增與熒光檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)與定量分析。羅氏（Roche）作為全球知名的生命科學(xué)與體外診斷企業(yè)，其 LightCycler 系列 qPCR 儀以穩(wěn)定的性能、優(yōu)良的光學(xué)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理能力聞名，長(zhǎng)期應(yīng)用于科研、臨床檢測(cè)、食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域。

對(duì)于預(yù)算有限或想快速擴(kuò)充實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力的用戶(hù)，二手羅氏熒光定量 PCR 儀是一個(gè)性?xún)r(jià)比較高的選擇。特別是 LightCycler 480 II 和 LightCycler 96 兩款機(jī)型，在二手市場(chǎng)保有量大、配件易獲取、維護(hù)成熟，能夠覆蓋從高通量到中等通量的多種應(yīng)用需求。

二、工作原理

羅氏 qPCR 系統(tǒng)的核心在于將熒光信號(hào)與核酸擴(kuò)增同步檢測(cè)。每一次 PCR 循環(huán)結(jié)束時(shí)，光學(xué)模塊會(huì)通過(guò)特定波長(zhǎng)的激發(fā)光照射反應(yīng)體系，熒光染料或探針在與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合后發(fā)射熒光。檢測(cè)器記錄信號(hào)強(qiáng)度的變化，并生成擴(kuò)增曲線(xiàn)。

主要檢測(cè)方式包括：

1. 染料法（SYBR Green 等）
   與雙鏈 DNA 結(jié)合后發(fā)光，信號(hào)強(qiáng)度與產(chǎn)物數(shù)量成正比，適用于基因表達(dá)定量、拷貝數(shù)檢測(cè)等基礎(chǔ)研究。

2. 探針?lè)ǎ═aqMan、FRET 探針等）
   特異性更高，利用探針與目標(biāo)序列的結(jié)合及酶切過(guò)程釋放熒光，實(shí)現(xiàn)高精度檢測(cè)，適用于臨床診斷、多重檢測(cè)和 SNP 分型。

羅氏 LightCycler 系列在光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)上較為獨(dú)特，使用多通道濾光組，減少通道間干擾，提高檢測(cè)靈敏度，并在溫控均一性方面保持行業(yè)領(lǐng)先水平。

三、主要型號(hào)及特點(diǎn)

1. LightCycler 480 II

• 貨號(hào)：05015278001

• 通量與兼容性：可支持 96 孔板、384 孔板，以及多種特殊格式反應(yīng)板，適合高通量檢測(cè)與大規(guī)模實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

• 光學(xué)系統(tǒng)：具備多波長(zhǎng)檢測(cè)能力，支持多重?zé)晒鈽?biāo)記實(shí)驗(yàn)，減少樣品用量的同時(shí)提高信息獲取效率。

• 溫控性能：溫度精確控制，孔間差異極小，保證擴(kuò)增一致性。

• 應(yīng)用場(chǎng)景：適合基因表達(dá)譜分析、大規(guī)模樣本篩查、臨床大通量病原體檢測(cè)等。

2. LightCycler 96

• 貨號(hào)：05815916001

• 通量與兼容性：固定 96 孔檢測(cè)平臺(tái)，可兼容標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板或 8 聯(lián)管，通量適中。

• 用戶(hù)界面：操作簡(jiǎn)潔直觀，配備彩色觸控屏，適合中小型實(shí)驗(yàn)室快速上手。

• 性?xún)r(jià)比優(yōu)勢(shì)：結(jié)構(gòu)緊湊，占用空間小，維護(hù)成本低，適合常規(guī)檢測(cè)與日常科研。

• 應(yīng)用場(chǎng)景：日?；蚨繖z測(cè)、教育培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)室、小批量病原體檢測(cè)等。

四、核心技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1. 溫控精準(zhǔn)與均一性
   高速升降溫系統(tǒng)確保循環(huán)時(shí)間短、溫度控制精確，減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間并提升重復(fù)性。

2. 高靈敏度檢測(cè)
   光學(xué)信號(hào)采集系統(tǒng)可檢測(cè)極低濃度的核酸模板，部分應(yīng)用可達(dá)到單拷貝級(jí)別靈敏度。

3. 多通道多重檢測(cè)
   支持多達(dá) 6 個(gè)熒光通道，實(shí)現(xiàn)一管內(nèi)多靶標(biāo)檢測(cè)，節(jié)省試劑與時(shí)間。

4. 軟件分析能力
   內(nèi)置分析軟件可直接完成 Ct 值計(jì)算、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)生成、相對(duì)定量、熔解曲線(xiàn)分析等，并可導(dǎo)出多種格式的報(bào)告。

5. 兼容性與擴(kuò)展性
   兼容多種耗材與化學(xué)體系，易于與自動(dòng)化加樣平臺(tái)、液體處理系統(tǒng)聯(lián)動(dòng)，適配不同實(shí)驗(yàn)規(guī)模。

五、二手設(shè)備采購(gòu)價(jià)值

購(gòu)買(mǎi)二手羅氏 qPCR 儀的優(yōu)勢(shì)主要體現(xiàn)在：

1. 成本優(yōu)勢(shì)
   二手設(shè)備價(jià)格通常為新品的 30%–60%，在保證性能的情況下顯著降低投入成本。

2. 性能依舊穩(wěn)定
   羅氏設(shè)備的設(shè)計(jì)壽命長(zhǎng)，光學(xué)模塊與溫控系統(tǒng)耐用，即使使用多年仍可保持高精度。

3. 配件與耗材易獲得
   因保有量大，配件與耗材在市場(chǎng)上容易采購(gòu)，且有成熟的維修服務(wù)渠道。

4. 適合快速擴(kuò)建實(shí)驗(yàn)室
   對(duì)于需要短時(shí)間內(nèi)建立檢測(cè)能力的團(tuán)隊(duì)，二手設(shè)備可立即部署投入使用。

六、典型應(yīng)用領(lǐng)域

1. 基礎(chǔ)科研

• 基因表達(dá)譜分析

• 功能基因篩選

• 拷貝數(shù)變異研究

2. 臨床檢測(cè)

• 病原體定量檢測(cè)（病毒載量、細(xì)菌負(fù)荷等）

• 遺傳病基因檢測(cè)

• 腫瘤分子標(biāo)志物分析

3. 食品與農(nóng)業(yè)檢測(cè)

• 轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)

• 食品致病菌監(jiān)測(cè)

• 動(dòng)植物疫病分子診斷

4. 環(huán)境監(jiān)測(cè)

• 水體微生物污染檢測(cè)

• 病原體環(huán)境溯源

七、使用與維護(hù)建議

1. 實(shí)驗(yàn)前檢查
   確保樣品臺(tái)和光學(xué)模塊清潔，避免熒光信號(hào)干擾。

2. 溫控校準(zhǔn)
   定期使用標(biāo)準(zhǔn)板進(jìn)行溫控精度檢測(cè)和校準(zhǔn)。

3. 耗材選擇
   使用與機(jī)型匹配的反應(yīng)板、管和封膜，避免漏液和蒸發(fā)。

4. 軟件更新
   保持軟件版本更新，以獲得更穩(wěn)定的性能和更豐富的分析功能。

5. 存放與運(yùn)輸
   二手設(shè)備運(yùn)輸前需固定光學(xué)部件，防止震動(dòng)損傷。

八、總結(jié)

二手羅氏 LightCycler 系列熒光定量 PCR 儀兼具高性能與高性?xún)r(jià)比，是科研與檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的優(yōu)質(zhì)選擇。LightCycler 480 II 更適合大規(guī)模、高通量、復(fù)雜多重檢測(cè)項(xiàng)目；而 LightCycler 96 則適合常規(guī)檢測(cè)、教學(xué)培訓(xùn)及中小型實(shí)驗(yàn)室日常應(yīng)用。對(duì)于資金有限或需要快速部署的團(tuán)隊(duì)，合理采購(gòu)并維護(hù)二手設(shè)備，可以在較低成本下獲得與新機(jī)接近的檢測(cè)能力。