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賽默飛熒光定量 PCR 儀（Quantitative PCR，簡稱 qPCR），是生命科學、醫學診斷、分子生物學以及環境監測等領域常用的重要檢測設備。它在傳統 PCR 的基礎上，通過引入熒光探針或熒光染料，實現對 DNA 或 RNA 擴增過程的實時監測與定量分析。相比終點法 PCR，熒光定量 PCR 能夠在反應進行的每一個循環中采集熒光信號，生成擴增曲線，從而精確計算核酸初始模板的數量。
賽默飛在 qPCR 技術領域具有多年研發與生產經驗，其產品線涵蓋從基礎科研到臨床檢測所需的不同型號，支持多種檢測通量、熒光通道和數據分析方式，適用于多樣化的應用場景。
熒光定量 PCR 主要基于兩種檢測方式：
非特異性熒光染料法
以 SYBR Green 等染料為代表，可與雙鏈 DNA 特異性結合，在激發光照射下發出熒光信號。隨著擴增產物增加，熒光強度同步增加。此方法成本較低，適合基因表達分析、拷貝數檢測等，但需要通過熔解曲線分析區分特異性與非特異性產物。
特異性探針法
以 TaqMan 探針、Molecular Beacon 等為代表，通過與目標序列的特異性結合，在 PCR 擴增過程中被 DNA 聚合酶切割釋放熒光基團，從而發射信號。這種方法特異性更高，適用于多重檢測、突變分析、病原體快速檢測等。
在擴增過程中，熒光信號在每個循環結束時被光學檢測系統采集，通過與標準曲線或 ΔΔCt 方法結合，即可得到目標核酸的定量結果。
賽默飛熒光定量 PCR 儀的典型結構包括：
溫控模塊（熱循環系統）
采用高精度半導體控溫技術，實現快速升降溫和循環溫度切換，溫度精度可達到 ±0.25°C，確保擴增的重復性與可靠性。
光學檢測系統
包含高亮度 LED 激發光源、多個波長的濾光片組，以及高靈敏度光電探測器，能夠在不同熒光通道間快速切換，支持多色檢測。
樣品承載系統
支持多種反應耗材，包括 96 孔、384 孔 PCR 板，或單管、條管等，方便根據實驗規模靈活選擇。
軟件與數據分析平臺
配套分析軟件可實時顯示擴增曲線、標準曲線、熔解曲線，并支持基因表達分析、SNP 分型、拷貝數分析、絕對定量與相對定量計算等。
高靈敏度與高重復性
光學系統噪聲低，溫度控制穩定，能夠檢測到低至幾個拷貝的模板分子。
快速反應
采用高效熱循環技術，反應時間較傳統 PCR 顯著縮短，常規 40 個循環可在 30 分鐘至 1 小時內完成。
多重檢測能力
具備 4–6 個以上熒光通道，可同時檢測多種靶標，提高檢測效率。
自動化與易用性
軟件界面直觀，支持預設模板和快速啟動功能；部分機型可通過網絡遠程監控實驗進程。
兼容多種化學體系
既可使用 SYBR Green，又可兼容 TaqMan 探針、FRET 探針等多種檢測方式，滿足不同實驗需求。
基因表達定量分析
通過檢測 cDNA 的 Ct 值，計算不同樣品中基因的相對表達量。
病原體檢測與分型
在臨床診斷中，用于快速檢測病毒、細菌及其特定亞型。
SNP 分型與突變檢測
應用于藥物代謝基因檢測、遺傳病篩查、腫瘤標志物研究等領域。
轉基因檢測與食品安全
用于監測農作物轉基因成分、食品中致病菌等。
拷貝數變異分析
檢測基因組中目標片段的拷貝數變化，與遺傳疾病及癌癥研究相關。
品牌技術積累深厚：賽默飛在分子檢測領域長期投入研發，產品性能穩定，適應多種實驗條件。
光學系統優化：減少通道間的熒光干擾，提高檢測精度。
溫控均一性佳：不同孔位間的溫差極小，保證了實驗的可重復性。
軟件功能全面：集成數據采集、分析和報告生成，減少手工計算工作量。
擴展性強：部分機型可與自動化工作站、液體處理平臺無縫連接，構建高通量檢測體系。
模板質量
樣品提取過程中要避免 RNA/DNA 降解，防止影響 Ct 值的準確性。
引物與探針設計
應確保特異性高、擴增效率接近 100%，并避免二聚體形成。
反應體系優化
根據試劑供應商建議，調整 Mg2? 濃度、酶用量、循環條件等。
對照設置
包括陰性對照、陽性對照、無模板對照（NTC）等，以排查污染或非特異性擴增。
數據解釋
需結合標準曲線和擴增效率進行分析，避免僅憑單一 Ct 值判斷結果。
更高通量與更小體積
微流控技術的應用將使檢測更快速、更低成本。
便攜化與現場檢測
小型化 qPCR 儀器將拓展到現場疾病監測、食品安全抽檢等領域。
與數字 PCR 結合
數字 PCR 提供更高絕對定量精度，未來可能與熒光定量 PCR 融合形成新型檢測平臺。
智能化與云分析
結合人工智能進行自動化數據分析與質控，提升結果可靠性，并實現遠程實驗室協作。
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