實時熒光定量PCR(Real-Time Quantitative PCR,qPCR)是當前生命科學和臨床診斷領域中最為常用的核酸檢測手段之一。該技術融合了傳統PCR的擴增優勢與實時檢測系統的定量功能,可在反應進行過程中同步監測產物積累量,從而實現目標基因的動態定量分析。PCR儀器的性能穩定性、靈敏度、通道配置及分析系統的智能程度,直接決定了實驗的精度與效率。
ABI 7500 實時熒光定量PCR儀是 Applied Biosystems 品牌(現屬于賽默飛世爾科技)推出的經典型號之一。自推出以來,該機型在全球多個科研、教學、臨床和檢驗單位中長期服役,憑借其高性價比與優良的兼容性,成為qPCR領域的黃金標準之一。本文將圍繞該儀器的選型價值、技術結構、使用建議及應用拓展進行全方位解讀。
ABI 7500 是一款中通量、通用型的qPCR系統,采用5通道熒光檢測系統,配合精密的熱控模塊和成熟的數據分析平臺,能夠完成定量PCR、SNP分型、基因表達、熔解曲線分析等多種應用任務。其設計平衡了性能與價格之間的關系,是中小型實驗室和初創單位理想的PCR平臺之一。
項目 | 參數說明 |
---|---|
孔板類型 | 標準96孔光學反應板 |
熒光檢測通道 | 5通道(FAM, VIC/JOE, ROX, TAMRA, Cy5) |
熒光檢測方式 | 激發-發射濾光片組合 + CCD攝像檢測系統 |
熱循環模塊 | Peltier系統控溫,精度±0.25°C |
升溫速率 | 最快2.5°C/s |
軟件支持 | SDS v1.4 / 7500 Software v2.x |
定量方法支持 | 絕對定量、相對定量、標準曲線、ΔΔCt |
數據輸出格式 | Excel、XML、TXT、圖表等多種格式 |
該設備配置5個獨立熒光通道,可以實現多重qPCR實驗,即在同一反應中檢測多個目標基因。這一功能特別適合病毒多靶點檢測、SNP分析及內參校正等高信息密度實驗。同時,五通道系統為后續擴展留下余地,使其適配更多熒光探針組合。
ABI 7500采用了高精度的Peltier控溫技術,能夠快速響應溫度變化,并在96孔板中實現良好的溫度均一性。這種特性對于保證各個樣本反應的一致性至關重要,尤其在進行定量分析或熔解曲線分析時尤顯重要。
SDS和7500 Software軟件操作邏輯清晰,界面直觀,提供多種數據分析模板,支持Ct值提取、標準曲線建立、基因表達折疊變化計算、SNP分型圖譜展示等功能,且數據可直接導入SPSS、GraphPad等統計工具進行后續處理。
設備運行穩定,抗干擾能力強,適用于長時間運行或連續實驗。與市面上大多數PCR反應體系(SYBR Green、TaqMan、探針類)高度兼容,幾乎不挑耗材,易于融入不同實驗平臺。
ABI 7500具有自動校準功能,操作維護便捷。即使是多年使用的設備,只要按周期進行燈泡、光學組件、熱模塊的維護,也能保持良好的性能狀態。此外,賽默飛及其授權服務商提供維修與備件服務,保障設備長期可用性。
病毒載量檢測:如乙肝、丙肝、HIV、SARS-CoV-2等
遺傳病分子診斷:基因突變篩查、SNP檢測
腫瘤標志物分析:miRNA、甲基化位點定量
個體化用藥基因分型
差異基因表達分析(qRT-PCR)
微量RNA定量(如miRNA、lncRNA)
拷貝數變異分析(CNV)
高分辨熔解曲線分析(HRM)
食源性致病菌檢測(沙門氏菌、大腸桿菌等)
轉基因成分分析
農殘與污染物相關基因檢測
水質微生物監控
DNA定量檢測
基因圖譜比對
親緣關系分析輔助驗證
特性維度 | ABI 7500 | QuantStudio 5 | LightCycler 96 | Roche480 II |
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通道數 | 5通道 | 最多6通道 | 4通道 | 最多6通道 |
孔板類型 | 96孔 | 96孔 / 384孔 | 96孔 | 96孔 / 384孔 |
HRM功能 | 不支持標準HRM | 可選配支持 | 支持基礎HRM | 高級HRM支持 |
操作界面 | 傳統電腦控制 | 觸屏+電腦控制 | 圖形化界面 | 軟件端強大 |
軟件兼容性 | 支持老版實驗設計 | 支持云平臺 | 本地分析 | 分析模型豐富 |
市場定位 | 教研/檢測機構常用 | 多功能中高端平臺 | 入門級平臺 | 高通量科研型 |
結論:ABI 7500最適合中通量、注重性能穩定與數據準確性的用戶,尤其是用于臨床分子實驗室與標準化檢測機構。
ABI 7500 已退出新機市場,目前流通多為二手或翻新設備。在選擇時應注意以下幾點:
是否附帶原裝配件(反應托盤、光學封板、安裝軟件)
是否經過專業維修、校準與檢測
是否提供質保或售后技術支持
軟件版本是否兼容當前操作系統(推薦Windows 7及以上)
若實驗預算有限,選購性能良好的二手設備是極具性價比的方案。
SDS軟件雖功能強大,但部分版本不兼容新系統。建議使用虛擬機環境或升級至7500 v2.x。
實驗數據需定期備份,避免由于系統或設備異常導致數據丟失。
若需云端共享與團隊協作,可考慮通過LIMS系統集成處理。
每周運行一次自檢程序,檢查熒光信號一致性。
保持設備環境干燥、防塵,定期清潔樣本艙。
每年進行一次全面校準(溫控模塊、燈泡、濾鏡組件)
關閉設備時,遵循完整的關機程序,避免系統損壞。
盡管目前ABI 7500已不再是賽默飛最新款的qPCR儀器,但在數十年廣泛的應用實踐中,其穩定性、可靠性、靈活性和數據精度依然贏得了用戶的長期信賴。在當下經濟與實驗效率并重的背景下,ABI 7500仍是許多科研機構、醫院實驗室、中型檢測單位的優選平臺。
只要選型得當、維護得力,這款經典設備仍將在未來相當長時間內繼續發揮其精準定量與多通道擴增的強大能力。如果您正在構建實驗室,或打算升級從事核酸定量檢測工作,ABI 7500值得認真考慮。
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