NanoDrop Eight是賽默飛推出的一款高通量微量分光光度計,具有一次同時測量8個樣品、樣品體積低至12 μL、波長覆蓋190850 nm的優勢,被廣泛用于核酸、蛋白及其他生物樣品的檢測。雖然該儀器具有高度自動化與簡便化的操作流程,但作為精密光學設備,合理使用與維護仍然十分關鍵。掌握注意事項能夠幫助實驗人員減少誤差、延長儀器壽命,并提高數據的準確性與可重復性。
溫度:保持在20~25℃,避免溫度劇烈波動。
濕度:控制在60%以下,過高濕度可能導致光學器件受潮。
光照與震動:遠離強光直射與震動源,避免外界干擾。
使用穩定電源,避免與高功率設備共用插座。
建議使用帶穩壓功能的電源插板,減少電壓波動。
開機后等待3~5分鐘預熱,使氙閃光燈穩定。
檢查檢測平臺是否潔凈,無殘留液滴或塵埃。
確認樣品臂運轉正常。
提前設置數據存儲路徑。
檢查軟件是否為最新版本,確保功能完整。
NanoDrop Eight檢測范圍廣,但仍需保證樣品濃度在檢測區間內。
對于濃度過高的核酸或蛋白,應進行稀釋。
樣品體積需嚴格控制在1.5~2 μL,避免過多或不足。
避免使用含高濃度鹽或有機溶劑的緩沖液,這些成分會在230 nm處產生干擾。
核酸樣品推薦使用無RNA酶/無DNA酶水,蛋白樣品推薦使用PBS或Tris緩沖液。
保證樣品均一,無沉淀或絮狀物。
檢測前充分混勻,避免局部濃度差異。
上樣時盡量避免產生氣泡。
每次檢測必須使用與樣品一致的緩沖液作為空白,進行基線校正。
使用移液器吸取樣品,避免吸頭內殘留氣泡。
將液滴準確置于檢測平臺中央。
不要讓液滴接觸到平臺邊緣,以免影響光路。
液滴覆蓋窗口后,應立即關閉樣品臂,防止蒸發。
操作時力度適中,避免損傷平臺。
根據實驗目的選擇合適模式:
核酸模式(260 nm)
蛋白模式(280 nm或顯色法)
OD600模式(細菌培養檢測)
全光譜掃描模式(190~850 nm)
模式選擇錯誤會導致結果不準確。
同時檢測多個樣品時,保持樣品上樣體積一致。
建議順序操作,避免因等待過久導致液滴蒸發。
260/280比值:1.8左右為DNA純凈,約2.0為RNA純凈。
260/230比值:2.0~2.2為理想范圍,低于此值可能有鹽或有機物污染。
A280法:適合高純度蛋白。
顯色法:適合復雜體系,需要標準曲線。
光譜解讀:若230 nm吸收過高,提示緩沖液成分干擾。
OD600值:用于判斷細胞密度或細菌生長階段。
樣品需充分混勻,避免分層。
可用于未知樣品或質量控制。
異常吸收峰提示可能存在雜質。
每次檢測結束后,用無RNA酶水或70%乙醇清潔。
避免殘留液滴干固在窗口上。
不可使用金屬工具刮擦,以免劃傷光學表面。
氙燈壽命較長,但需避免頻繁開關機。
如發現光譜漂移,應進行校準或聯系廠家維護。
定期備份數據,避免丟失。
建議實驗室建立統一的數據命名與存檔規范。
長期不用時,應斷開電源,并用防塵罩覆蓋。
保持環境干燥,避免光學部件受潮。
原因:樣品蒸發、氣泡、平臺不干凈。
經驗:快速操作并保持平臺清潔。
原因:緩沖液干擾或稀釋不當。
經驗:檢查緩沖液成分,必要時更換。
原因:上樣體積不一致或樣品混勻不足。
經驗:操作需規范,保持體積一致。
原因:樣品純度低或光路受污染。
經驗:檢查樣品質量,必要時重新純化。
每次實驗前后,養成清潔檢測平臺的習慣。
樣品檢測盡量一次性完成,減少蒸發影響。
對重要樣品重復檢測三次,取平均值。
在科研工作中,保存完整光譜數據而非單一濃度值,便于后續分析與復查。
建立實驗室標準操作流程,統一數據命名與記錄格式。
NanoDrop Eight分光光度計以其快速、高效和靈敏的特點,在分子生物學實驗中被廣泛使用。然而,它是一臺對操作細節極為敏感的精密儀器。使用者需在樣品準備、上樣操作、模式選擇、數據解讀和日常維護等環節嚴格遵循規范。通過總結和遵守上述注意事項,既能確保檢測結果準確可靠,也能延長儀器使用壽命,提升實驗室整體運行效率。
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