賽默飛分光光度計(jì) BioMate 160 是一款高性能的紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì),主要用于對(duì)樣品在不同波長(zhǎng)下的光吸收強(qiáng)度進(jìn)行精確測(cè)量。光度測(cè)量是該設(shè)備最基礎(chǔ)、也是最常用的功能之一,通過(guò)檢測(cè)樣品對(duì)光的透過(guò)和吸收情況,研究者能夠快速獲得物質(zhì)的濃度信息及相關(guān)理化特性。
在現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室中,光度測(cè)量廣泛應(yīng)用于核酸、蛋白質(zhì)定量,酶動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn),微生物生長(zhǎng)曲線繪制,以及食品檢測(cè)、藥物分析和環(huán)境監(jiān)測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域。BioMate 160 以其波長(zhǎng)范圍廣、測(cè)量精度高、操作簡(jiǎn)便和結(jié)果可靠的優(yōu)勢(shì),成為科研和教學(xué)的重要工具。
光照射到物質(zhì)時(shí),部分光子會(huì)被吸收,部分會(huì)透射或散射。分光光度計(jì)通過(guò)測(cè)量透射光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度的比值,推導(dǎo)出物質(zhì)的吸光度。
吸光度(A)與溶液濃度(c)及光程(l)成正比,遵循朗伯-比爾定律:
A = ε × c × l
其中,ε 為摩爾吸光系數(shù),是物質(zhì)在特定波長(zhǎng)下的吸收能力。
通過(guò)吸光度值判斷樣品濃度;
通過(guò)多點(diǎn)測(cè)定繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行定量分析;
通過(guò)吸收光譜掃描,判斷樣品特征吸收峰。
覆蓋 190–1100 nm,可滿足紫外與可見(jiàn)光區(qū)的各種檢測(cè)需求。
誤差小于 ±1 nm,確保光度測(cè)量的準(zhǔn)確性。
2 nm 光譜帶寬,兼顧分辨率與透光率。
采用氘燈與鎢燈組合:
氘燈:適用于紫外區(qū)(190–350 nm);
鎢燈:適用于可見(jiàn)光和近紅外區(qū)(350–1100 nm)。
固定波長(zhǎng)光度測(cè)量:在單一波長(zhǎng)下測(cè)定樣品吸光度;
多波長(zhǎng)光度測(cè)量:可在多個(gè)波長(zhǎng)下同時(shí)獲取數(shù)據(jù);
掃描模式:自動(dòng)掃描全光譜,繪制吸收曲線;
定量分析:結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行濃度計(jì)算;
動(dòng)力學(xué)模式:實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)吸光度隨時(shí)間的變化。
打開(kāi)電源,選擇合適的光源;
光源預(yù)熱 10–15 分鐘,確保穩(wěn)定。
選擇石英比色皿(紫外區(qū)測(cè)定)或光學(xué)玻璃比色皿(可見(jiàn)區(qū)測(cè)定);
檢查比色皿清潔度,避免指紋、水滴或殘留雜質(zhì)。
樣品溶液應(yīng)澄清無(wú)氣泡;
吸光度在 0.1–1.0 之間為最佳范圍;
根據(jù)需要進(jìn)行稀釋或純化。
使用相同溶劑作為參比液,置入?yún)⒈缺壬螅?/p>
儀器設(shè)置為零點(diǎn)校正,以消除溶劑吸收對(duì)結(jié)果的影響。
將樣品比色皿置入樣品槽,設(shè)定波長(zhǎng);
記錄吸光度或透過(guò)率值;
可選擇單波長(zhǎng)、多波長(zhǎng)或掃描測(cè)量。
對(duì)核酸和蛋白質(zhì),可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)公式換算濃度;
對(duì)復(fù)雜樣品,建議繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比對(duì)。
稀釋樣品避免吸光度過(guò)高;
使用緩沖液保持樣品穩(wěn)定;
防止光敏感樣品暴露在強(qiáng)光下。
確保比色皿擺放方向一致;
采用重復(fù)測(cè)量,減少偶然誤差;
對(duì)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn),應(yīng)保持溫度恒定。
定期更換光源,保證光強(qiáng)穩(wěn)定;
定期進(jìn)行波長(zhǎng)校準(zhǔn);
使用專用清潔布清理光學(xué)窗口。
吸光度過(guò)高 (>2.0)
解決:稀釋樣品,保持在檢測(cè)線性范圍內(nèi)。
基線漂移
可能原因:光源未穩(wěn)定、比色皿不干凈;
解決:延長(zhǎng)預(yù)熱時(shí)間,清洗比色皿。
重復(fù)性差
可能原因:操作不規(guī)范,樣品分層;
解決:混勻樣品,保持操作一致。
核酸/蛋白質(zhì)純度異常
A260/A280 比值偏離正常值;
解決:重復(fù)提取或進(jìn)一步純化。
在 260 nm 測(cè)量吸光度,利用公式計(jì)算濃度;
A260/A280 比值用于判斷純度。
280 nm 測(cè)定蛋白質(zhì)天然吸收;
595 nm 使用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。
在特定波長(zhǎng)監(jiān)測(cè)反應(yīng)產(chǎn)物吸收變化;
計(jì)算酶速率常數(shù)。
600 nm 測(cè)量濁度(OD600);
繪制生長(zhǎng)曲線。
藥物降解曲線測(cè)定;
水體中有機(jī)物檢測(cè)(如 COD 相關(guān)比色法)。
科研價(jià)值
支持分子生物學(xué)、藥學(xué)、環(huán)境科學(xué)等研究;
提供快速、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)支持。
教學(xué)價(jià)值
演示光譜學(xué)原理;
幫助學(xué)生理解吸光度與濃度關(guān)系。
應(yīng)用廣度
從基礎(chǔ)化學(xué)到臨床檢測(cè)均可使用;
支撐跨學(xué)科實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
自動(dòng)化擴(kuò)展
與自動(dòng)進(jìn)樣器聯(lián)用,實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)。
微量樣品檢測(cè)
支持 1–2 μL 樣品的精確定量。
信息化結(jié)合
數(shù)據(jù)實(shí)時(shí)上傳實(shí)驗(yàn)室管理系統(tǒng);
支持云端共享與遠(yuǎn)程分析。
賽默飛分光光度計(jì) BioMate 160 在光度測(cè)量方面具備高精度、廣波長(zhǎng)范圍和多功能模式,能夠滿足科研、教學(xué)及工業(yè)檢測(cè)的多樣化需求。通過(guò)優(yōu)化樣品準(zhǔn)備、操作條件和數(shù)據(jù)分析,可顯著提升實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性與重復(fù)性。作為實(shí)驗(yàn)室的重要設(shè)備,它不僅是一臺(tái)檢測(cè)儀器,更是推動(dòng)科學(xué)研究與技術(shù)創(chuàng)新的重要支撐平臺(tái)。
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