賽默飛(Thermo Fisher Scientific)BioMate 160 分光光度計是一款專為生命科學和基礎科研設計的高性能紫外-可見分光光度計。該設備廣泛應用于核酸、蛋白質定量,酶動力學實驗,細胞生長監測,以及常規分析實驗中。BioMate 系列憑借操作簡便、檢測靈敏和重復性佳,在分子生物學、藥學、食品科學、臨床檢測等領域均有廣泛應用。
BioMate 160 在設計上注重實用性,支持自動化校準、多種檢測模式以及高精度光學系統。其光源覆蓋 190–1100 nm 波長區間,能夠滿足紫外區(如核酸吸收峰 260 nm)和可見區(如蛋白質染料法 595 nm)多種檢測需求,為實驗室提供可靠的數據支撐。
BioMate 160 基于紫外-可見光分光光度原理。通過單色儀將光源發出的連續光譜分離成單一波長,再經過樣品池后由光電檢測器接收透射光強度,并轉化為電信號。根據信號強弱與參比光比較,即可得出樣品對特定波長光的吸收值(A)。
吸光度與樣品濃度成正比(朗伯-比爾定律)。
在固定波長下,通過測量吸光度可反推出溶液中目標分子的濃度。
波長范圍:190–1100 nm,覆蓋紫外至可見區。
波長精度:±1 nm,確保測量可靠。
光譜帶寬:2 nm,兼顧分辨率和透光率。
光源系統:氘燈(紫外區)與鎢燈(可見區)組合,保證全波段穩定照射。
檢測模式:固定波長檢測、掃描、定量分析、動力學曲線、DNA/蛋白質直接定量等。
自動化功能:自動波長校準、光程校正,支持多種比色皿規格。
快速核酸/蛋白質定量,無需復雜操作。
支持酶動力學實驗,實時監測反應進程。
軟件操作界面簡潔,可直接輸出標準曲線與實驗數據。
數據穩定性高,減少重復測定的偏差。
在 260 nm 下檢測核酸濃度。
通過 A260/A280 比值評估核酸純度(一般應在 1.8–2.0)。
通過 A260/A230 比值判斷是否有有機物或鹽類污染。
紫外吸收法:在 280 nm 測量蛋白中芳香族氨基酸殘基吸收。
染料結合法:如考馬斯亮藍法(595 nm)、雙縮脲法(562 nm)。
選擇反應產物或底物的特定波長,連續記錄吸光度變化。
繪制酶速率曲線,獲得 Km、Vmax 等動力學參數。
在 600 nm 測定培養液的濁度(OD600)。
用于判斷細胞密度和生長曲線。
色素含量檢測(如葉綠素、類胡蘿卜素)。
藥物降解與穩定性分析。
水質監測與環境檢測。
為了充分發揮 BioMate 160 的性能,實驗過程中需在樣品準備、操作流程和數據分析等環節進行優化。
避免氣泡:比色皿內的氣泡會導致光路受阻,應輕輕震蕩去除。
濃度范圍合適:吸光度宜在 0.1–1.0 之間,過高需稀釋。
純度控制:樣品中雜質會干擾吸收峰,必要時進行純化。
溶劑匹配:對照液與樣品使用相同緩沖液,確保空白校準準確。
預熱光源:氘燈與鎢燈需預熱 10–15 分鐘,以保證光源穩定。
波長選擇:應選擇目標分子特異性吸收峰,避免干擾。
比色皿選擇:核酸、蛋白檢測宜用石英比色皿(透過紫外區),常規檢測可用光學玻璃比色皿。
溫度控制:對酶動力學實驗,需保持恒溫,避免因溫度波動導致反應速率偏差。
重復測量:每個樣品至少重復測定 3 次,取平均值。
繪制標準曲線:對定量實驗,使用已知濃度系列標準品建立曲線。
動態監測:動力學實驗應設定適當采樣間隔(如 5–10 秒),確保曲線平滑。
背景扣除:排除緩沖液或空白樣品的背景吸收。
吸光度異常偏高
可能原因:比色皿有殘留、樣品濃度過高。
解決措施:清洗比色皿或稀釋樣品。
基線漂移
可能原因:光源未充分預熱,或比色皿表面有指紋/水滴。
解決措施:延長預熱時間,保持比色皿清潔。
重復性差
可能原因:樣品混勻不足,操作不規范。
解決措施:每次取樣前充分混勻,避免分層。
A260/A280 比值偏離
可能原因:樣品被蛋白質或有機物污染。
解決措施:進一步純化核酸,重復檢測。
光源壽命問題
氘燈壽命一般約 1000 小時,應定期檢查更換。
建議使用過程中避免頻繁開關,以延長壽命。
在核酸提取實驗中,常因殘留鹽離子或表面活性劑干擾,導致比值異常。通過嚴格控制洗脫液體積,并在測定前使用離心步驟去除雜質,顯著提高了測定的準確性。
實驗初期發現速率曲線波動大,經分析為溫度不穩所致。后續在比色皿外配置恒溫循環系統,曲線重現性明顯改善。
在 OD600 測定時,因細胞團聚導致數值偏差。通過輕柔震蕩分散細胞后再檢測,曲線更加平滑且符合生長規律。
BioMate 160 不僅是科研實驗室的重要工具,也在教學中具有獨特優勢:
科研價值:適用于分子生物學、醫學、環境科學等多學科研究,為實驗提供定量依據。
教學價值:直觀展示光譜學原理,幫助學生理解吸收與濃度關系。
跨學科應用:既可服務于基礎化學實驗,也能滿足生命科學研究需求。
隨著科研需求的提升,BioMate 160 的應用也不斷拓展:
與信息化結合:通過與實驗室管理系統對接,實現數據云存儲和共享。
小樣本檢測優化:未來將進一步支持微量樣品檢測,如低至 1–2 μL 的核酸檢測。
自動化擴展:與自動進樣器聯用,提升高通量實驗效率。
賽默飛 BioMate 160 分光光度計以其高精度、穩定性和多功能性,成為實驗室常規檢測和科學研究的重要工具。通過優化樣品制備、操作流程和數據處理,可以最大限度地發揮儀器性能,提升實驗結果的可靠性與重復性。在科研和教學中,它不僅是一臺檢測設備,更是連接基礎原理與應用實踐的橋梁。
杭州實了個驗生物科技有限公司