賽默飛分光光度計(jì)Evolution One比色實(shí)驗(yàn)

詳情

賽默飛分光光度計(jì)Evolution One比色實(shí)驗(yàn)詳解

一、背景與意義

比色法是分析化學(xué)和生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)中最為常見的定量檢測方法。通過測量溶液對特定波長光的吸收程度，可以計(jì)算出被測物質(zhì)的濃度。這一方法具有原理簡明、操作方便、靈敏度較高等優(yōu)點(diǎn)，因此被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)定量、核酸檢測、酶學(xué)反應(yīng)監(jiān)測、環(huán)境污染物分析以及食品添加劑檢測等領(lǐng)域。

賽默飛世爾科技的 Evolution One分光光度計(jì) 專為紫外-可見光區(qū)域設(shè)計(jì)，光學(xué)性能穩(wěn)定，軟件功能豐富，特別適合開展多種比色實(shí)驗(yàn)。它不僅能滿足科研院所的日常檢測，也能支撐制藥、生物企業(yè)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)的大批量分析任務(wù)。

二、比色實(shí)驗(yàn)的基本原理

光吸收與濃度關(guān)系

根據(jù)朗伯-比爾定律：
$A = ε ? c ? l$
其中，A為吸光度，ε為摩爾吸收系數(shù)，c為濃度，l為光程。
在一定濃度范圍內(nèi)，吸光度與濃度呈線性關(guān)系。

顯色反應(yīng)的作用

很多物質(zhì)本身不具備明顯的吸收峰，需要通過化學(xué)試劑反應(yīng)生成有色化合物，再進(jìn)行比色測定。
例如蛋白質(zhì)的Bradford法，依賴考馬斯亮藍(lán)與蛋白結(jié)合產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物。

波長選擇的重要性

不同顯色體系在不同波長處有最大吸收峰，正確設(shè)定波長是比色實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。

三、Evolution One的光學(xué)特點(diǎn)

寬波長覆蓋

范圍為 190–1100 nm，能夠覆蓋核酸、蛋白質(zhì)、酶學(xué)反應(yīng)、無機(jī)離子等實(shí)驗(yàn)的常用波長。

高分辨率與低雜散光

分辨率優(yōu)于1.0 nm，雜散光小于0.05%。
即使在深紫外區(qū)，也能保證比色實(shí)驗(yàn)的精確度。

穩(wěn)定光源與自動(dòng)切換

配備氘燈和鎢燈雙光源，根據(jù)波長自動(dòng)切換，避免人為誤差。

智能化軟件支持

內(nèi)置比色實(shí)驗(yàn)方法庫，涵蓋蛋白、核酸、酶學(xué)和常見化學(xué)分析。
用戶可自定義參數(shù)并保存方法模板，提升實(shí)驗(yàn)效率。

四、比色實(shí)驗(yàn)的常用參數(shù)設(shè)定

波長選擇

Bradford法：595 nm。
BCA法：562 nm。
Lowry法：750 nm。
核酸檢測：260 nm（濃度），280 nm（純度）。
NADH檢測：340 nm。

比色皿光程

標(biāo)準(zhǔn)10 mm比色皿用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)。
微量比色皿（1–2 μL）用于珍貴或有限樣品。

測量模式

單波長模式：檢測單一吸收峰。
多波長模式：同時(shí)監(jiān)測多個(gè)波長，例如260/280比值。
動(dòng)力學(xué)模式：實(shí)時(shí)監(jiān)控吸光度隨時(shí)間的變化。

掃描速度與間隔

常規(guī)實(shí)驗(yàn)：掃描間隔1 nm。
動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)：采樣間隔5–10秒。

五、比色實(shí)驗(yàn)流程示例

1. 蛋白質(zhì)定量（Bradford法）

準(zhǔn)備工作

配制考馬斯亮藍(lán)工作液。
制備蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液。

實(shí)驗(yàn)步驟

向各比色皿中加入不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液和顯色試劑。
混勻后靜置5–10分鐘。
在595 nm下測定吸光度。

結(jié)果分析

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品濃度。

2. 核酸濃度與純度檢測

步驟

取核酸溶液，使用純水為空白對照。
在260 nm和280 nm下測定吸光度。

分析

濃度：OD260 × 稀釋倍數(shù) × 系數(shù)。
純度：OD260/OD280 比值，1.8–2.0為純核酸。

3. 酶活性測定

原理

NADH在340 nm處有最大吸收峰。
通過監(jiān)測吸光度隨時(shí)間的下降，計(jì)算酶活性。

步驟

在反應(yīng)體系中加入底物和酶液。
設(shè)置采樣間隔為5秒，持續(xù)監(jiān)測3–5分鐘。

結(jié)果

繪制曲線，計(jì)算ΔA/min，折算酶活性單位。

六、應(yīng)用領(lǐng)域中的比色實(shí)驗(yàn)

分子生物學(xué)

核酸提取純度檢測。
蛋白質(zhì)濃度定量。

臨床檢測

血清酶學(xué)指標(biāo)，如AST、ALT活性檢測。
臨床化學(xué)檢測試劑盒的適配。

環(huán)境監(jiān)測

水體中重金屬離子的比色測定。
亞硝酸鹽、氨氮等污染物的快速檢測。

食品安全

食品添加劑含量檢測。
農(nóng)藥殘留比色法分析。

七、比色實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)管理

實(shí)時(shí)顯示與曲線生成

實(shí)驗(yàn)過程中，Evolution One自動(dòng)繪制吸光度曲線。

標(biāo)準(zhǔn)曲線存儲(chǔ)

可保存常用試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線，減少重復(fù)操作。

數(shù)據(jù)導(dǎo)出

支持USB、網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)出Excel和PDF格式，方便實(shí)驗(yàn)記錄與共享。

合規(guī)支持

符合21 CFR Part 11標(biāo)準(zhǔn)，提供審計(jì)追蹤與權(quán)限管理。

八、比色實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)

試劑準(zhǔn)備

必須使用新鮮配制的顯色試劑，避免氧化影響結(jié)果。

比色皿清潔

比色皿需徹底清洗，保持光程一致，防止殘留造成背景干擾。

空白對照

每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置空白，消除溶劑和顯色劑的背景吸收。

濃度范圍

樣品濃度需落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，避免超線性區(qū)。

九、未來發(fā)展趨勢

自動(dòng)化與高通量

未來分光光度計(jì)可能結(jié)合微孔板檢測，實(shí)現(xiàn)批量比色實(shí)驗(yàn)。

智能參數(shù)推薦

AI算法可根據(jù)試劑類型自動(dòng)設(shè)定波長、稀釋倍數(shù)。

綠色實(shí)驗(yàn)理念

提高靈敏度，減少顯色試劑用量，降低實(shí)驗(yàn)室廢液。

十、總結(jié)

賽默飛 Evolution One分光光度計(jì) 在比色實(shí)驗(yàn)中的優(yōu)勢不僅體現(xiàn)在光學(xué)性能優(yōu)異，還包括軟件友好、方法庫豐富、數(shù)據(jù)處理靈活等方面。它能夠覆蓋 蛋白定量、核酸檢測、酶學(xué)反應(yīng)、環(huán)境監(jiān)測、食品檢測 等廣泛應(yīng)用場景。

通過合理的參數(shù)設(shè)定與標(biāo)準(zhǔn)化操作，Evolution One讓比色實(shí)驗(yàn)具備更高的 準(zhǔn)確性、重復(fù)性和合規(guī)性。它不僅是一臺(tái)分光光度計(jì)，更是實(shí)驗(yàn)室在定量檢測領(lǐng)域的重要平臺(tái)。

推薦產(chǎn)品