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Thermo Scientific Applied?Biosystems 3500 系列 Sanger 測序/片段分析儀采用毛細(xì)管電泳技術(shù)，支持 8 通道（3500）或 24 通道（3500xL），兼具測序與片段分析功能。高度自動化設(shè)計，從樣品加載、儀器校準(zhǔn)、運行維護到數(shù)據(jù)采集均實現(xiàn)智能化控制。平臺支持多種模塊如基因測序、STR 分型、微衛(wèi)星分析、LOH 及 SNP 驗證，具備易安裝耗材、RFID 追蹤、自動數(shù)據(jù)導(dǎo)出等功能，為遺傳研究和法醫(yī)生物識別提供高通量穩(wěn)定方案。
3500 系列支持廣泛樣本類型輸入，包括：
基因組 DNA：5–50?ng 推薦輸入量；
cDNA 或質(zhì)粒 DNA：建議 1–20?ng，用于克隆或表達分析；
PCR 擴增產(chǎn)物：結(jié)合熒光標(biāo)記引物（如 FAM/VIC/NED/PET）定量濃度；
STR 或法醫(yī)鑒定樣本：結(jié)合 Identifiler、GlobalFiler 等試劑盒；
片段分析產(chǎn)物：應(yīng)用于 microsatellite、LOH、AFLP、MLPA 分析。
所有樣本須經(jīng)過定量（如 Qubit/PicoGreen），清除抑制物（蛋白質(zhì)、鹽殘留），保持濃度在建議范圍內(nèi)。PCR 產(chǎn)物需進行酶切或純化，確保峰形清晰、信噪比佳。
上機使用預(yù)制 96 孔板或小型片段分析片架。建議統(tǒng)一樣本排列、設(shè)置陰陽性對照。板布局支持通過 Data Collection 軟件導(dǎo)入預(yù)設(shè)模板，實現(xiàn)自動識別并追蹤樣品信息。填裝樣本后需貼上條形碼或 RFID 標(biāo)簽，與虛擬樣本庫對應(yīng)。
插入板架：輕推到位；
加注模板和緩沖液（含染料泊泊和緩沖液包）；
蓋好板蓋，保持清潔；
關(guān)閉運行艙門；
軟件提示確認(rèn)板號、樣本信息。
系統(tǒng) 8 或 24 通道毛細(xì)管陣列預(yù)裝 POP-4 聚合物，支持 36?cm 或 50?cm 長。陣列帶 RFID 標(biāo)簽記錄使用次數(shù)（推薦 ≤160 注射次數(shù)），每孔注射體積 ≤1.2?μL。更換陣列需重新校準(zhǔn)。
在 Data Collection 軟件設(shè)置：
注射電壓/時間：如 1.6?kV，5–15?秒；
分離電壓：一般設(shè) 15 kV；
Oven 溫度：設(shè)定 60?°C 提升峰形穩(wěn)定；
運行時間：35–60?分鐘，根據(jù)片段長度／分辨率；
染色方案：選擇 4–6～染料組別，如 G5-OSR/J6-OSR；
OSR 特殊設(shè)定：打開 off?scale recovery（信號飽和可擴展到 65K RFU）提高高濃DNA 檢測率。
需要使用：
陰陽極緩沖液：由緩沖劑盒提供；
POP-4 聚合物：隨機補充以維持填充量；
Condition Reagent：用于陣列預(yù)處理；
氫氧化去離子水：用于沖洗和復(fù)填。
注入時務(wù)必避免氣泡，清理邊緣滴液，定期更換以維持電泳效率。
空間／光譜校準(zhǔn)：按安裝 SOP 自動運行；
檢查 CCD 激光系統(tǒng)、熒光穩(wěn)定性、基線干擾；
軟件自動檢查耗材 RFID、緩沖容量、電力狀態(tài)；
QC 通過后，點擊“Start Run”啟動運行。
運行中實時監(jiān)控：
注射電流（uA）和電壓波動；
溫度曲線；
熒光強度（RFU）；
E?PT 曲線：判斷運行穩(wěn)定性；
異常報警：信號偏低、高電阻、緩沖量不足等即時提示。
低信號強度：檢查 DNA 濃度／PCR 產(chǎn)物純度；
注射失敗：更換毛細(xì)管陣列，檢查漏液或堵塞；
分辨率下降：清理膠體，重新校準(zhǔn)；
高背景噪聲：更換緩沖液，確認(rèn)環(huán)保裝置排風(fēng)；
數(shù)據(jù)偏差：核查系統(tǒng)校準(zhǔn)歷史、軟件升級狀態(tài)。
運行完成后軟件自動生成 .ab1 或 .hid 文件。可選擇上傳 Thermo Fisher Connect 平臺，實現(xiàn)遠(yuǎn)程監(jiān)控、郵件通知、云存儲跟蹤。支持 21 CFR Part 11 自動審計、用戶權(quán)限控制、E?Signature。
3500：約 96 注射/天 ×8 通道；
3500xL：24 通道，提升3倍通量；
操作時間包括：30?min 準(zhǔn)備 + 60?min 運行 + 10?min 后處理 ≈100?min/批；
一天可提升至 10?批以上，約數(shù)百樣本輸出。
每次運行后沖洗陣列、涂潤滑劑；
每周更換 POP-4 聚合物、緩沖溶液；
每月執(zhí)行空間/光譜校準(zhǔn)；
每季度更換注射器、屏蔽墊圈；
定期檢查電極、激光器穩(wěn)定性；
儀器艙保持干凈、干燥，防塵，避免潮氣腐蝕。
制定 SOP，培訓(xùn)操作員；
樣品編號嚴(yán)格統(tǒng)一；
實驗日志記錄，包括試劑批號、耗材周期、運行異常；
鏈接 LIMS 系統(tǒng)，電子數(shù)據(jù)審計與文件歸檔。
3500/3500xL 系統(tǒng)通過以下優(yōu)勢實現(xiàn)高效樣品輸入與數(shù)據(jù)產(chǎn)出：
支持廣泛樣本類型，滿足基因組、片段分析等需求；
自動化流程—從上樣至數(shù)據(jù)采集全鏈條集成；
靈活方法設(shè)置—注射、電壓、溫度、染料組合可調(diào)；
高通量與高分辨率并重；
QC 與校準(zhǔn)機制完善，確保實驗可靠性；
遠(yuǎn)程監(jiān)控與審計功能，適合規(guī)范實驗室管理。
通過規(guī)范操作、及時維護及數(shù)據(jù)管理，系統(tǒng)可持續(xù)實現(xiàn)高質(zhì)量輸出，適用于科研、法醫(yī)、臨檢等多種實驗應(yīng)用。
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